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《河北科技大学》 2016年
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三氯生对两栖动物蝌蚪内分泌干扰作用及急性毒性的研究

高昆  
【摘要】:三氯生(TCS)是个人护理品中常用抗菌剂,在水体中普遍存在,但目前对于三氯生的生态毒性及内分泌干扰效应研究仍较少。本研究以黑斑蛙蝌蚪和非洲爪蛙蝌蚪为对象,考察TCS对其的急性毒性及其内分泌干扰效应。将处于第一个蝌蚪发育期的黑斑蛙蝌蚪(Gosner26期)和非洲爪蛙蝌蚪(NF46期)分别暴露于不同浓度的TCS,测定其对蝌蚪的半数致死浓度(96 h-LC50)。结果发现,TCS对黑斑蛙蝌蚪和非洲爪蛙蝌蚪的96 h-LC50分别为441μg·L-1和280μg·L-1;TCS对非洲爪蛙蝌蚪毒性均略大于对黑斑蛙蝌蚪。根据《化学农药环境安全评价试验准则》中第十八部分天敌两栖动物的急性毒性分级标准,判定TCS的毒性等级为高毒。将处于蝌蚪发育窗口期的非洲爪蛙蝌蚪(Gosner46期)分别暴露于不同浓度的TCS(3.6 nM·L-1、36 nM·L-1、360 nM·L-1)中,包括环境浓度。E2(1.2 nM·L-1)作为阳性对照,非洲爪蛙蝌蚪发育至Gosner66期试验结束。通过分子指标及性腺组织形态,评价其对非洲爪蛙蝌蚪的内分泌干扰效应。结果发现,非洲爪蛙蝌蚪甲状腺出现异常增生,且非洲爪蛙雄性蝌蚪性腺出现卵巢结构。表明TCS对非洲爪蛙蝌蚪产生雌激素效应且对甲状腺发育有干扰作用。将处于蝌蚪发育窗口期的黑斑蛙蝌蚪(Gosner24期)分别暴露于不同浓度的TCS(1 nM·L-1、10 nM·L-1、100 nM·L-1)中,包括环境浓度。DHT(100μg·L-1)作为阳性对照,黑斑蛙蝌蚪发育至Gosner43期试验结束。研究其对黑斑蛙蝌蚪的内分泌干扰效应。结果发现,TCS导致黑斑蛙雌性蝌蚪性腺出现精巢结构。表明TCS对黑斑蛙蝌蚪具有雄激素效应。
【关键词】:三氯生 非洲爪蛙 黑斑蛙 蝌蚪 急性毒性 内分泌干扰
【学位授予单位】:河北科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:X171.5
【目录】:
  • 摘要4-5
  • Abstract5-8
  • 第1章 绪论8-18
  • 1.1 三氯生概述8-9
  • 1.1.1 环境中三氯生的来源8
  • 1.1.2 三氯生在环境中的污染分布8-9
  • 1.1.3 生物体中TCS的污染9
  • 1.2 TCS的毒性9-12
  • 1.2.1 TCS的急性毒性9-10
  • 1.2.2 TCS在体外试验的内分泌干扰效应10
  • 1.2.3 TCS在体内试验的内分泌干扰效应10-11
  • 1.2.4 TCS对甲状腺的影响11-12
  • 1.3 两栖类动物在内分泌干扰作用研究中的应用12-16
  • 1.3.1 非洲爪蛙在内分泌干扰作用研究中的应用14-16
  • 1.3.2 黑斑蛙在内分泌干扰作用研究中的意义16
  • 1.4 本文研究的内容和意义16-18
  • 第2章 三氯生对非洲爪蛙和黑斑蛙蝌蚪的急性毒性18-24
  • 2.1 引言18
  • 2.2 材料与方法18-20
  • 2.2.1 仪器与试剂18
  • 2.2.2 试验动物18-19
  • 2.2.3 药物暴露19
  • 2.2.4 数据统计19-20
  • 2.3 结果20-21
  • 2.4 本章小结21-24
  • 第3章 三氯生对非洲爪蛙性腺及甲状腺发育的影响24-40
  • 3.1 引言24
  • 3.2 实验试剂与仪器24-25
  • 3.2.1 实验试剂24
  • 3.2.2 实验仪器24-25
  • 3.3 实验取材与方法25-30
  • 3.3.1 主要溶液配制25-26
  • 3.3.2 试验动物26-27
  • 3.3.3 暴露和取样27
  • 3.3.4 实时荧光定量PCR实验步骤27-30
  • 3.4 组织切片的制备与观察30-32
  • 3.5 数据统计32
  • 3.6 结果与分析32-38
  • 3.6.1 脑分子数据分析32-35
  • 3.6.2 性腺分子数据分析35-36
  • 3.6.3 性腺组织学分析36-37
  • 3.6.4 甲状腺组织学分析37-38
  • 3.7 本章小结38-40
  • 第4章 三氯生对黑斑蛙蝌蚪性腺发育的影响40-50
  • 4.1 引言40
  • 4.2 实验试剂与仪器40-41
  • 4.2.1 实验试剂40
  • 4.2.2 实验仪器40-41
  • 4.3 实验取材与方法41-43
  • 4.3.1 主要溶液配制41
  • 4.3.2 实验动物41-42
  • 4.3.3 暴露和取样42
  • 4.3.4 性腺RNA提取42-43
  • 4.4 组织切片的制备与观察43-44
  • 4.5 黑斑蛙性别区分基因摸索44-45
  • 4.6 结果与分析45-48
  • 4.6.1 性腺组织学分析45
  • 4.6.2 性别比例分析45-46
  • 4.6.3 性别基因摸索46-48
  • 4.7 本章小结48-50
  • 结论50-52
  • 参考文献52-60
  • 攻读硕士学位期间发表论文60-62
  • 致谢62

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