收藏本站
《安徽农业大学》 2016年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

家蚕BmZFP16-like基因cDNA的克隆、表达及功能初探

张倩倩  
【摘要】:家蚕是鳞翅目的模式昆虫,具有重要的经济价值,其丝腺是一种高度特异化且能够高效地合成丝蛋白的器官,研究表明丝蛋白基因的表达主要是在转录调控水平上进行的,这是目前研究的热点。锌指蛋白是一类在真核细胞中普遍存在的与细胞内核酸特异性结合的转录因子。本研究发现了在家蚕丝腺特异表达的并且含有C2H2型ZFP结构域的转录因子—BmZFP16-like,采用克隆、表达、qRT-PCR、western blot等技术对其生物信息学特征、转录水平以及蛋白质水平的组织表达模式进行了分析,探讨了BmZFP16-like在家蚕丝素重链蛋白基因的转录调控中的作用。获得的主要研究结果如下:1、通过在GenBank中与其它鳞翅目昆虫锌指蛋白保守序列比对,设计特异性引物进行克隆、测序,序列分析表明该基因的ORF序列为984 bp,编码327个氨基酸,预测该蛋白分子量为37.4 kDa,其等电点为6.15。该蛋白质C末端含有6个高度保守的ZFP结构域,属于ZFP家族,进化分析表明该序列与黑脉金斑蝶锌指类蛋白ZFP16同源性较高,因此命名为BmZFP16-like。2、构建了原核表达质粒pET28a-BmZFP16-like,转化至E.coli Transetta(DE3),用不同浓度IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot的检测结果表明BmZFP16-like融合蛋白能够在原核表达系统中高效表达。通过Ni柱亲和层析纯化了该重组蛋白,并制备了多克隆抗体。3、分别提取家蚕丝腺等不同组织及家蚕不同发育时期丝腺的RNA和总蛋白,通过荧光定量PCR和Western blot分析家蚕BmZFP16-like在不同组织及不同发育时期的转录水平和蛋白表达情况。结果表明BmZFP16-like基因的表达存在相对的时空特异性,其中在丝腺中的表达量最高,在脂肪体中表达量最低,从四眠后期开始逐渐升高,到五龄7天达到最高,到预蛹期基本不表达,这一表达模式与丝素重链基因(fib-H)的表达模式类似。4、提取不同品种(P50和H9)的丝腺RNA和总蛋白,运用荧光定量PCR法和免疫印迹法检测丝腺中BmZFP16-like的转录表达水平和蛋白表达情况。结果显示BmZFP16-like基因在H9中的表达量要高于P50,由此推测BmZFP16-like基因很可能参与fib-H基因的转录调控。5、对BmZFP16-like与fib-H的表达调控区相互作用分析,BmZFP16-like第二个锌指结构域α螺旋区的3个氨基酸可以与fib-H启动子的5’上游侧翼区TATA盒相互识别,预示着BmZFP16-like基因可能在丝蛋白基因的转录调控网络中发挥着重要作用。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S881.26

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王秋悦;邹亚学;唐家明;李素芬;;含锰超氧化物歧化酶基因结构及其转录调控[J];河北科技师范学院学报;2012年04期
2 郑蘅;;为什么丝腺到五龄期特别发达[J];蚕桑通报;1982年04期
3 周仙美;;丝腺的解剖与标本的制作[J];蚕桑通报;1980年01期
4 田中一行,霸井隆重三,长岛荣一;绢丝的构造——关于家蚕绢丝腺的生理和遗传[J];蚕学通讯;1994年03期
5 ;家蚕生理生化学讲座(三) 第三讲 丝腺[J];江苏蚕业;1986年03期
6 周家喜,孔宪刚;马传染性贫血病毒转录调控[J];中国预防兽医学报;2001年06期
7 华刚;张坚;胡雨婷;卫正国;王军;易军;;雌二醇对家蚕丝腺生长的影响[J];江苏蚕业;1993年01期
8 付锡三;茧丝的形成[J];陕西蚕业;1984年02期
9 金媛;张耀鹏;杭怡春;罗杰;邵惠丽;胡学超;;蚕体内不同丝腺部位丝蛋白溶液结构与性质的研究[J];高分子通报;2012年05期
10 铃木义昭;陈锡潮;;丝腺中丝素及丝胶基因的转录表达(上)[J];国外农学-蚕业;1985年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郑家顺;吴加金;孙之荣;;两个蛋白质家族转录调控的统计计算分析与比较[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
2 朱庆林;吴补领;余擎;孔辉;费俭;王铸钢;;核心结合因子α1亚基对釉原蛋白转录调控的研究[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
3 潘敏慧;冯振月;洪开丽;田志强;鲁成;;家蚕丝腺细胞系的建立及其基因表达特征[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
4 翟亚峰;束刚;朱晓彤;高萍;傅伟龙;江青艳;;肠道特异性转录调控元件的转录活性筛选及细胞特异性鉴定[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
5 钟仰进;曾林;刘吉平;黄志君;梁红;邓小娟;杨婉莹;曹阳;顾世红;;家蚕蛹变态期丝腺组织自发的和诱导的细胞凋亡特征(昆虫学报已受理)[A];中国蚕学会第四届青年学术研讨会会议论文集[C];2004年
6 马文涛;闫若潜;吴志明;刘光辉;盛敏;谢彩华;;猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
7 丁梦蝶;鲁丹;王红宁;田浪;阳泰;张毅;樊汶樵;郭自成;;禽传染性支气管炎病毒多基因串联表位抗原的原核表达研究[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
8 林海波;张桂红;詹国英;廖明;任涛;罗开健;曹伟胜;徐成刚;辛朝安;;猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
9 隋桂琴;左玲;王桂云;;人碱性成纤维细胞生长因子的原核表达[A];中国眼底病论坛·全国眼底病专题学术研讨会论文汇编[C];2008年
10 黄斯勇;梁英民;韩骅;李国辉;伍艳兰;康志杰;何飞;张萍;徐恒;刘利;;人Detla-like4ext-93-217原核表达、纯化及蛋白活性检测[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈未中;去甲基化蛋白酶ALKBH5与转录调控蛋白NaID结构和性质的研究[D];中国科学技术大学;2016年
2 袁佳;VDAC2基因的转录调控及功能研究[D];武汉大学;2013年
3 康寿凯;基于cDNA展示与邻近连接测定转录调控复合物的One-Pot-seq方法[D];华中农业大学;2015年
4 郑冠涛;非编码RNA在人类癌症中的转录调控研究[D];华东师范大学;2017年
5 刘万霖;基于基因表达谱及序列特征的转录调控关系挖掘[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
6 王进;真核基因转录调控元件识别及转录调控关系构建[D];南京大学;2011年
7 张德楠;基于高通量数据的转录调控预测分析与调控网络构建研究[D];哈尔滨工业大学;2014年
8 常怀普;家蚕丝腺组学分析及丝腺表皮蛋白功能研究[D];西南大学;2017年
9 陈瑞婷;家蚕细胞及丝腺退化和凋亡的程序性细胞信号通路中BmDredd基因的功能[D];浙江大学;2017年
10 邹青宇;转录调控网络功能模块结构分析与模块识别算法研究[D];吉林大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张倩倩;家蚕BmZFP16-like基因cDNA的克隆、表达及功能初探[D];安徽农业大学;2016年
2 吴桐思雨;粟酒裂殖酵母中人DJ-1同源基因的表达与转录调控研究[D];南京师范大学;2015年
3 钟小莉;Ascl2对人结肠癌上皮细胞内CDX2基因的转录调控作用[D];第三军医大学;2015年
4 马小娟;斜卧青霉转录调控蛋白Hac1在蛋白分泌调控中的功能研究[D];西北农林科技大学;2015年
5 邓文斌;转录因子NF-κB对AGGF1的转录调控研究[D];华中科技大学;2015年
6 张永辉;AQP3在乳腺癌的表达及RUNX2对其转录调控研究[D];天津医科大学;2016年
7 张明智;MEIS1对PAX6的转录调控研究[D];西北农林科技大学;2016年
8 郭克;Pur α与Egr1对Aβ前体蛋白(APP)的转录调控研究[D];宁夏医科大学;2013年
9 张萍;猪miR-122的靶基因鉴定、转录调控及其对PCV2复制的效应[D];山东农业大学;2017年
10 李龙;猪ANK1基因启动子活性与转录调控及多态性分析[D];广西大学;2017年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026