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《安徽农业大学》 2016年
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茶树脱水素基因的克隆与非生物胁迫下蛋白的Western-blot分析

舒锡婷  
【摘要】:茶树是一种多年生的木本植物,在生长发育的过程中受到多种逆境因素的影响。为了提高茶树的抗逆性,培育优质高产的茶树品种,一般都采用优化栽培措施,改善栽培条件等,但是品种的抗逆遗传特性才是起决定作用的因素。研究茶树抗逆机理,发掘抗性相关基因及蛋白,对开展茶树分子育种有着积极意义。本研究采用基因克隆(RACE)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)技术,研究了不同胁迫下茶树叶片中脱水素基因及蛋白家族的表达模式,得出以下结论:1、从茶树中克隆得到CsDHN3的cDNA全长序列,序列分析表明其全长为869bp,开放阅读框(ORF)为627 bp,编码208个氨基酸,为21.7 kD小分子量的中性多肽,其预测的等电点为6.95。序列分析表明为亲水性蛋白,无信号肽,属于非分泌蛋白,进化树分析发现茶树CsDHN3与油茶的亲缘关系最近。运用qRT-PCR技术分析了茶树不同组织(顶芽、成熟叶片、花、根和种子)中CsDHN3的表达水平,结果表明,CsDHN3具有组织特异性且主要分布在茶树种子中。随着脱水处理时间的增加而增加,到30 h的时候表达量达到最大值为对照的2.13倍,此时种子中的含水量已经降到20.04%,之后CsDHN3的表达量出现明显的下调。2、茶树叶片总蛋白提取通过TCA-丙酮沉淀法、试剂盒法和酚-甲醇/醋酸铵沉淀法比较发现,其中酚-甲醇/醋酸铵沉淀法用时短,蛋白浓度高、SDS-PAGE电泳条带清晰,背景干净,满足Western-blot技术要求。3、在非生物胁迫(低温、干旱、ABA、BR)处理下,对10种不同分子量的茶树脱水素蛋白的表达模式进行了研究,发现其中95、65和48 kD 3种蛋白表达量较为稳定。58 kD仅在干旱处理25 d达到最大值,复水后又趋于对照水平;37 kD仅在AB A处理12 h时达到最大值,之后又逐渐降低。34 kD在低温和干旱处理下均上升;在ABA处理12 h时达到最大值,之后又逐渐降低。28 kD在低温处理下表达量逐渐上升;在BR处理下逐渐的降低。26 kD仅在干旱胁迫下积累。21 kD在低温、干旱和BR处理下都降低,在ABA处理24 h达到最大值。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S571.1

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