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《南昌大学》 2018年
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Octenisept溶液对粪肠球菌抗菌效果的体外研究

娄亭亭  
【摘要】:研究背景:根管治疗术是目前治疗牙髓病和根尖周疾病的主要方法,而粪肠球菌是导致根管治疗失败的主要致病菌之一~([1])。在机械预备根管的同时辅以具有高效抗菌作用的冲洗液冲洗根管,可有效杀灭根管内的细菌。次氯酸钠是目前临床上使用最广泛的根管冲洗液之一,但因其对生活组织有较强的毒性、气味难闻、化学性能不稳定等,在很大程度上限制了高浓度次氯酸钠的使用,也大大降低了临床疗效。Octenisept(OCT)是一款新型高效广谱抗菌药物,杀菌力强且生物相容性好,可有效地杀灭粪肠球菌~([2-5])。但不同浓度Octenisept溶液对于感染根管内粪肠球菌生物膜的抗菌作用尚不明确。本研究将通过测定不同浓度Octenisept对不同状态粪肠球菌及感染根管模型中粪肠球菌生物膜的抗菌效果等一系列相关研究来探讨Octenisept作为一种新的根管冲洗液的可行性。目的:1、评价Octenisept对悬浮状态粪肠球菌的抗菌效果。2、评价并比较不同浓度的Octenisept和次氯酸钠对粪肠球菌生物膜的杀灭效率。3、评价并比较不同浓度的Octenisept和次氯酸钠对感染根管内粪肠球菌的抗菌效果。方法:1、采用常量肉汤稀释法分别测定Octenisept和次氯酸钠对粪肠球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。2、在24孔细胞培养板上建立粪肠球菌24 h生物膜模型并随机分为7组(分别采用5.25%NaOCl、2.5%NaOCl、1%NaOCl、100%Octenisept、50%Octenisept、25%Octenisept和生理盐水进行作用),每组2块板,分别加入2 ml不同冲洗液,各冲洗液均分别在5 s、10 s、15 s、20 s、30 s、1 min、3 min、5 min、10 min、15 min、20 min、30 min时加入相应中和剂。终止反应之后取出1ml混合液体加入含有2 ml BHI液体培养基的试管中。37℃培养48 h后从各管中取10μl涂平板,37℃再次培养24 h后观察各平板细菌生长情况。根据各平板细菌生长情况记录各冲洗液完全抑制细菌生长的时间。3、选取单根管离体牙76颗,粪肠球菌感染21天,建立粪肠球菌根管感染模型,感染前后分别随机抽取3个样本,于扫描电镜下观察感染前牙本质小管开放情况和感染后根管壁上粪肠球菌生物膜的形成情况,以确定该方法是否可成功建立稳定的根管体外感染模型。将70个成功建立的根管感染模型样本随机分为7组,每组10个样本。分别采用5.25%NaOCl(A组)、2.5%NaOCl(B组)、1%NaOCl(C组)、100%Octenisept(D组)、50%Octenisept(E组)、25%Octenisept(F组)及0.9%生理盐水(G组)冲洗根管。各组冲洗前、冲洗后分别取样接种于BHI琼脂培养基上,CO_2恒温培养箱中孵育48 h后计数菌落数(CFU/m1)。同时每组冲洗后随机抽取4个样本处理固定后置于扫描电镜下观察根管内牙本质表面及牙本质小管内的粪肠球菌清除情况。结果:1、Octenisept的MIC值为0.625%,MBC值为2.5%;NaOCl的MIC值为0.025%;MBC值为0.1%。2、各冲洗液均可完全清除24孔板中的粪肠球菌24 h生物膜(即杀菌率达100%),所需的时间从短到长依次为:5.25%NaOCl、100%Octenisept、2.5%NaOCl、50%Octenisept、1%NaOCl、25%Octenisept。其中5.25%NaOCl、2.5%NaOCl和100%Octenisept、50%Octenisept完全清除24孔板中的粪肠球菌24 h生物膜所需时间均较短且相近,无明显统计学差异(P0.05),而与1%NaOCl和25%Octenisept相比有统计学差异(P0.05);1%NaOCl和25%Octenisept两组相比无统计学差异(P0.05)。3、根管感染模型建立前样本根管于扫描电镜下观察,见根管内壁清洁、大多数牙本质小管口敞开。4、根管感染模型建立后样本根管于扫描电镜下观察,见粪肠球菌在根管内壁附着形成生物膜,部分细菌进入牙本质小管。5、根管冲洗实验:各实验组冲洗前根管内细菌数量差异无显著性(P0.05),冲洗后根管内细菌数量较冲洗前显著降低(P0.01)。各组冲洗前后细菌计数差值从大到小依次为A组、B组、D组、C组、E组、F组、G组。组间两两比较,其中A组与其余各组间差异有显著性(P0.05);B组、D组间比较结果显示差异无显著性(P0.05),而与其余各组间比较显示差异有显著性(P0.05);C组与E组间比较无明显差异(P0.05),与其余各组间比较差异有显著性(P0.05)。6、各组经不同冲洗液冲洗后,扫描电镜下分别观察根管内壁冠1/3、中1/3、根1/3段粪肠球菌生物膜的清除效果,可见:A、B、C、D、E、F组冲洗液对根管冠1/3处的粪肠球菌生物膜都有较好的清除效果;各组对根中1/3处的细菌生物膜清除情况一般,A组效果明显优于其他各组,B组与D组清除效果相近,但优于C组与E组(两组生物膜清除效果相近),F组效果最差;各组对根尖1/3处的粪肠球菌生物膜清除效果均较差。结论:1、Octenisept对悬浮状态下的粪肠球菌具有较好的杀菌作用。2、5.25%NaOCl、2.5%NaOCl和100%Octenisept、50%Octenisept均可快速有效地清除粪肠球菌24 h生物膜。4、按本实验方法可有效建立粪肠球菌根管感染模型。3、100%Octenisept溶液对根管内粪肠球菌生物膜的抗菌性能与2.5%NaOCl相近,并且优于1%NaOCl,表明100%Octenisept可有效地清除根管内的粪肠球菌生物膜。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R781.05

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