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《武汉科技大学》 2016年
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利用改良胚胎干细胞试验测定双酚A和金属镉的胚胎发育毒性

张双玲  
【摘要】:目的:建立以神经分化为观察终点的改良胚胎干细胞试验体系,并利用该体系判定双酚A和氯化镉的胚胎发育毒性。方法:(1)神经分化方法的建立与验证:应用荧光定量PCR检测神经分化过程中神经细胞特异性标志物MAP2、Nestin、KCC2的m RNA表达情况,以探讨最佳胚胎干细胞首次接种密度以及神经细胞培养液培养时间;应用免疫荧光技术检测神经分化过程中神经细胞特异性标志物MAP2、Nestin、KCC2、β-TubullinⅢ的蛋白表达情况,以验证神经分化方法的可行性。(2)改良EST试验的建立:将建立的神经分化方法与经典EST结合,判定双酚A和氯化镉的胚胎发育毒性。设立阳性对照5-Fu和阴性对照Penicillin-G,以检测该判定体系的可信性。结果:(1)胚胎干细胞首次接种密度为15×10~4/孔,神经细胞培养液培养时间为12天,相比于MAP2和KCC2,Nestin更适合作为神经分化抑制试验的检测指标。免疫荧光技术结果表明,神经细胞特异性标志物几乎表达于所有细胞中,表明该神经分化方法可行。(2)以神经分化为观察终点的EST判定BPA具有弱胚胎发育毒性,而Cd Cl_2具有强胚胎发育毒性。阳性对照5-Fu被判定为具有强胚胎发育毒性,而阴性对照Penicillin-G被判定为无胚胎发育毒性,表明该检测体系具有可信性。结论:本研究初步探讨了胚胎干细胞神经分化方法,在此基础上建立了以神经分化为观察终点的胚胎干细胞试验,并成功检测了BPA和CdCl_2的胚胎发育毒性。对该实验体系的进一步完善,将有利于提高EST的试用范围和检验效能。
【学位授予单位】:武汉科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R114

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