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《暨南大学》 2016年
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壬基酚暴露对斑马鱼热休克蛋白表达量的影响

贾利兴  
【摘要】:热休克蛋白(Heat Shock Proteins)是所有生物体在其生活环境中遇到温度突变、病原体侵染、理化有害因素等刺激后产生的一种在进化上高度保守并由热休克基因编码的应激性蛋白。许多热休克蛋白均具有分子伴侣活性。在生物体的细胞保护、抗击衰亡、被破坏蛋白的修复和折叠及疾病预警等方面有着非常重要的作用。HSP70家族和HSP90家族是目前最为重要的两个基因家族,在生物体内产生很多重要的作用,能够作为水域生态环境清洁状况的早期预警指标。本研究课题以生殖能力强、易于大量培育、敏感性高的水生动物斑马鱼为研究材料,采用实时荧光定量PCR技术检测了斑马鱼的三种HSP基因(HSP70、HSP90a和HSP90b)在壬基酚直接暴露和摄食NP暴露食物条件下斑马鱼三种组织(肝脏、大脑和肌肉)中的HSPs mRNA表达水平。得出的结论如下:(1)壬基酚直接暴露可诱导斑马鱼HSP70、HSP90a和HSP90b基因的特异性表达,肝脏、大脑、肌肉中三种基因的表达规律较为一致,在一定时间范围内,均表现出先升高到最大值后,再降低,随着处理时间的持续延长,逐渐恢复;HSP70基因在肝脏、大脑和肌肉中高表达峰值出现在8d时;HSP90a基因在肝脏和大脑中高表达峰值出现在8d时,在肌肉中出现在24d时;HSP90b基因在肝脏和大脑中高表达峰值出现在8d时,在肌肉中出现在16d时。(2)斑马鱼摄食壬基酚污染食物条件下三个基因的表达量变化规律总体上与直接暴露条件下三个基因的表达规律一致,但表达量均高于NP直接暴露斑马鱼条件下三个基因的表达量,该现象可能与壬基酚在斑马鱼体内的富集量不同有关,和本实验中低浓度NP诱导表达量高于高浓度NP诱导表达量的研究规律相一致。(3)以β-actin作为内参基因建立了HSP70、HSP90a和HSP90b三个基因的实时荧光定量PCR检测方法。分析结果表明,这三个基因对壬基酚处理均有较强的敏感性,尤以HSP70基因最敏感,可以作为污染物早期预警的生物标志物。
【关键词】:斑马鱼 热休克蛋白 壬基酚 表达量 影响
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:X503.225
【目录】:
  • 摘要3-4
  • ABSTRACT4-7
  • 第一章 前言7-19
  • 1.1 热休克蛋白(HSPs)的研究概述7-10
  • 1.2 壬基酚(NP)的简介10-13
  • 1.3 实时荧光定量聚合酶链式技术概述13-14
  • 1.4 生物标志物的概述14-17
  • 1.5 本文的研究目的及意义17-19
  • 第二章 壬基酚直接暴露后斑马鱼HSPs基因的表达定量19-37
  • 2.1 实验材料与方法19
  • 2.2 试验试剂的配制19-20
  • 2.3 实验试剂和药品20-21
  • 2.4 仪器设备21
  • 2.5 实验方法与设计21-26
  • 2.6 结果与分析26-27
  • 2.6.1 总RNA质量的检测26
  • 2.6.2 目的基因的验证26-27
  • 2.7 基因的表达结果27-33
  • 2.7.1 不同浓度NP处理对斑马鱼三种组织中HSP70基因表达的影响27-29
  • 2.7.2 不同浓度NP处理对斑马鱼三种组织中HSP90a基因表达的影响29-31
  • 2.7.3 不同浓度NP处理对斑马鱼三种组织中HSP90b基因表达的影响31-33
  • 2.8 讨论33-35
  • 2.9 本章小结35-37
  • 第三章 斑马鱼摄食NP污染食物条件下的HSPs基因表达37-49
  • 3.1 实验材料与方法37-39
  • 3.2 实验方法与材料处理39-40
  • 3.3 结果与分析40-46
  • 3.3.1 不同浓度NP处理对斑马鱼三种组织中HSP70基因表达的影响40-42
  • 3.3.2 不同浓度NP处理对斑马鱼三种组织中HSP90a基因表达的影响42-44
  • 3.3.3 不同浓度NP处理对斑马鱼三种组织中HSP90b基因表达的影响44-46
  • 3.4 讨论46-48
  • 3.5 本章小结48-49
  • 第四章 结论与展望49-50
  • 4.1 结论49
  • 4.2 展望49-50
  • 参考文献50-58
  • 学术成果及学术会议58-59
  • 硕士期间发表的论文58
  • 参加的学术会议58
  • 论文课题基金资助58-59
  • 致谢59

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