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《兰州大学》 2017年
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新型温敏性水凝胶培养系统的构建及BMSCs膜片培养与分离的研究

徐茜  
【摘要】:目的:通过生物仿生的方式制备温敏性水凝胶培养系统,探索BMSCs膜片培养与分离的最佳条件,为生物组织工程的构建提供实验基础。方法:1)将2 g/L多巴胺(dopamine,DA)溶液加入聚苯乙烯培养皿(tissue culture polystyrene,TCPS)中,在60?C下,使DA自聚合生成聚多巴胺(polydopamine,PDA)薄膜覆盖于培养皿表面,碱溶液氧化后,将末端氨基化的聚异丙基丙烯酰胺(PNIPAM-NH2)接枝到聚多巴胺表面,形成温敏性培养系统。采用傅里叶转换红外光谱分析仪(FTIR)、扫描电子显微镜(SEM)及接触角测试仪对化学键、表面形貌及润湿性进行表征。2)在水凝胶温敏培养系统中接种兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),置于37?C,5%CO2孵箱培养构建BMSCs膜片,并于20?C下分离,获得BMSCs膜片。通过倒置相差显微镜,MTT(噻唑蓝)法研究BMSCs膜片的生长条件及特性,以及细胞膜片分离的条件和结构。结果与结论:1)FTIR结果显示聚苯乙烯表面出现聚多巴胺及PNIPAM的特征吸收峰;SEM可见颗粒状PNIPAM凝胶接枝于聚苯乙烯上;接触角测试结果显示,当温度为37?C时,呈现相对疏水性,当温度为20?C时,呈现相对亲水性。因此成功地构建了接枝有PNIPAM水凝胶的培养系统。2)MTT结果显示,温敏性水凝胶培养系统中细胞存活率均大于对照组(普通TCPS培养皿)细胞存活率(100%),材料毒性分级为0级,材料合格,证明合成的温敏性水凝胶培养系统可以用于实验室细胞培养及相关用途。3)BMSCs细胞培养显示,BMSCs细胞在37?C时可以正常贴壁、生长并增殖,形成致密的细胞膜片之后,通过降低温度至20?C,分离出完整的细胞膜片,可用于组织工程中细胞膜片的构建。
【关键词】:聚多巴胺 PNIPAM 温敏性水凝胶 细胞膜片 组织工程
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R318
【目录】:
  • 中文摘要3-4
  • Abstract4-9
  • 第一章 绪论9-17
  • 1.1 温敏性水凝胶的研究进展9-12
  • 1.1.1 PNIPAM水凝胶的温敏性9-10
  • 1.1.2 PNIPAM水凝胶的制备10
  • 1.1.3 PNIPAM水凝胶的应用10-12
  • 1.2 细胞膜片技术的研究进展12-15
  • 1.2.1 细胞膜片技术概述12-13
  • 1.2.2 细胞膜片在组织工程中的应用13-15
  • 1.3 选题依据和研究思路15-17
  • 第二章 聚多巴胺薄膜的仿生合成及表征17-22
  • 2.1 材料和方法17-18
  • 2.2 实验结果18-20
  • 2.3 讨论与小结20-22
  • 第三章 温敏性水凝胶培养系统的构建及性能研究22-30
  • 3.1 材料和方法22-23
  • 3.2 实验结果23-27
  • 3.3 讨论与小结27-30
  • 第四章 BMSCs细胞膜片的建立和分离30-40
  • 4.1 材料和方法30-34
  • 4.2 实验结果34-39
  • 4.3 讨论与小结39-40
  • 第五章 全文总结40-42
  • 参考文献42-48
  • 在学期间的研究成果48-49
  • 致谢49-50
  • 病例50-56

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